引用本文： 熊健, 吴蕾, 皮御阳, 许咏冬. 非小细胞肺癌淋巴结 Beclin 1 表达与淋巴结转移的关系. 中国胸心血管外科临床杂志, 2019, 26(10): 984-987. doi: 10.7507/1007-4848.201902002 复制
Beclin 1 是目前受到广泛关注的自噬基因之一，其在多种肿瘤组织中表达不一，被认为是观察肿瘤发展及与肿瘤预后密切相关的指标之一。研究表明，当 Beclin 1 表达异常时，肿瘤的发生几率大幅增加[1-4]。不过其在肺癌中的作用目前并不确定。一些学者认为其与非小细胞肺癌的发生、发展及预后相关，可作为肿瘤预后的一个观测指标，如董桂兰等[5]发现自噬相关蛋白 Beclin1 表达下调可能参与了非小细胞肺癌的发生及发展，类似的研究还有不少[6-8]。由于肿瘤的预后与肿瘤的分期密切相关，特别是淋巴结是否转移及转移的程度是肿瘤分期的一个重要指标，而目前 Beclin 1 基因与肺癌淋巴结转移的关系并不明确。因此，了解 Beclin 1 基因表达水平与肿瘤淋巴结转移程度是协助判断 Beclin 1 基因水平是否与肿瘤预后有关的一项重要观察点。现回顾性分析我院 2009 年 9 月至 2016 年 9 月收治的 204 例肺癌患者的临床资料。
1 资料与方法
1.1 临床资料和分组
2011 年 9 月至 2016 年 9 月我院共收治 204 例非小细胞肺癌患者，其中男 116 例、女 88 例，平均年龄（55.3±11.2）岁。所有患者术前评估包括血液学检测、气管镜、头颅 CT、胸部 CT、骨扫描、腹部 B 超、心电图、肺功能检查。入组标准：术前评估无远处转移，纵隔淋巴结>1 cm 者行超声支气管镜穿刺活检，病理证实阳性者行新辅助化疗 2 周。排除标准：术前检查证实有远处转移者，术前评估无法耐受手术者。据肺癌淋巴结转移与否将所有患者分为无淋巴结转移组（N0 组）、有肺叶间和叶内淋巴结转移、无纵隔淋巴结转移组（N1组）和纵隔淋巴结转移组（N2组）。
1.2 手术方法
所有患者均行肺癌根治术，术中行系统性纵隔淋巴结清扫。切取部分标本组织采用 Western blotting 法测量 Beclin 1 水平，采用苏木精-伊红染色制作病理学标本。术后常规留置胸腔引流管，抗炎化痰支持治疗。癌旁正常组织取材为距离肿瘤边界 5 cm 以上。
1.3 统计学分析
采用 SPSS 22.0 统计软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（
±s）表示，组间比较采用重复测量方差分析或秩和检验；率的比较采用 χ2 检验。P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
204 例非小细胞肺癌患者中鳞癌 36 例、腺癌 168 例，其中 N0 组 111 例、N1组 142 例、N2 组 51 例。
三组患者肿瘤组织 Beclin 1 水平随着淋巴结转移站数增加逐渐降低，差异有统计学意义（P<0.05）。三组患者 N1 Beclin 1 水平对比，N1 组和 N2 组较 N0 组明显偏低，差异有统计学意义（P<0.01）。三组患者 N2 Beclin 1 水平对比，N2 组较 N0 组及 N1 组明显偏低，差异有统计学意义（P<0.01，表1）。
表1
三组样本组织中 Beclin 1 水平比较（
）
N0 组 N1、N2 Beclin 1 水平相近，差异无统计学意义（P>0.05）。N1 组 N1 Beclin 1 水平低于 N2 Beclin 1，差异有统计学意义（P<0.01）。N2 组 N2 Beclin 1 水平略高于 N1 Beclin 1 水平，但差异无统计学意义（P>0.05，表1）。
3 讨论
通过循环再利用细胞内大分子物质，清除受损细胞器，自噬基因可有效维持细胞内环境的稳定，其与细胞的增殖过程密切相关，亦可参与肿瘤的发生发展过程。Beclin 1 基因是目前受到极大关注的一种自噬基因，当与 PI3K 形成复合体后，可调节自噬前体结构中的 ATG 蛋白位置，进而调节自噬活性。作为抑癌基因，其缺乏可导致全身多个器官细胞癌变，如 Song 等[9]发现，Beclin 1 低表达有助于提高胰腺癌患者总生存期（OS）及无病生存期，上调体内 Beclin 1 水平可加快肿瘤的进展及提高其侵袭性。Wang 等[10]也发现 Beclin 1 表达水平与胃癌的大小、淋巴结转移程度及肿瘤侵袭程度密切相关。Beclin 1 高表达可促进 MKN-45 胃癌细胞的凋亡，抑制其向远处转移。因而 Beclin 1 可作为胃癌发生的抑制剂，成为胃癌治疗的可能靶点。类似的研究还有不少[11-13]。
在肺癌方面，目前的研究表明 Beclin 1 与肺癌的预后有一定关联，如 Zhou 等[14]的研究表明，Beclin 1 低表达非小细胞肺癌患者的 OS 仅 28 个月，明显低于 Beclin 1 高表达组，并且 Beclin 1 低表达与肺癌淋巴结转移密切相关。我们的数据也提示肺癌组织 Beclin 1 水平较正常组织偏低，与已有研究结果类似。影响肺癌预后的一个重要因素在于肿瘤的分期，特别是有无纵隔淋巴结转移对术后分期至关重要。目前对淋巴结标本有无转移主要采用病理切片的方式，虽然石蜡切片的精确度很高，但依然存在部分误差。在精准化治疗的今天，是否能采取病理切片联合其他指标提高诊断的精确性值得期待。在我们的研究中发现，Beclin 1 基因在转移淋巴结中的表达明显低于无转移淋巴结，且差异有统计学意义。这提示未来判断是否存在淋巴结转移时，Beclin 1 基因水平可作为一个重要的考量指标，若淋巴结病理切片阴性而 Beclin 1 水平较正常值偏低者，需再次复核以免漏诊，尤其对于病理切片介于良恶性之间的标本，Beclin 1 水平可能成为判断结果的有力证据。
我们的研究数据表明，在 N2 组患者中，N1 Beclin 1 表达水平较 N2 Beclin 1 略低，考虑可能是由于 N1 先出现转移，随后再导致 N2 转移，N1 转移时间较 N2 更长，故 Beclin 1 基因受影响时间更长所致。但两组数据对比差异并无统计学意义，故在有淋巴结转移的患者当中，Beclin 1 表达水平仅能判断是否存在淋巴结转移，但并不能帮助判断是取自哪一站淋巴结。
少部分并发纵隔淋巴结转移的肺癌患者存在跳跃性转移现象，从肺部淋巴液转流途径看这种现象难以理解，目前对为何存在这种现象暂无定论。既往对淋巴结的检测均为病理切片，是否存在 N1 漏诊导致跳跃性转移率升高值得探讨。联合 Beclin 1 检测后可提高 N1 淋巴结转移的检出率，是否会降低跳跃性转移的发生率值得进一步探究。
有研究提示 TNM 分期晚的肿瘤 Beclin 1 水平较分期早的患者低[15]。我们的数据也提示，N2 组肿瘤 Beclin 1 水平较 N1 组和 N0 组偏低，且差异有统计学意义，考虑 N2 组 TNM 分期普遍较 N0 和 N1 组更差，故 N2 组肿瘤 Beclin 1 水平较 N1 组和 N0 组更低，这与已有研究基本相符。不过虽然淋巴结是分期的一个重要因素，但肿瘤的大小、位置对肿瘤分期也有很大影响，故单测肿瘤组织本身的 Beclin 1 水平可能无法判断该患者是否并发 N1 或 N2 淋巴结转移，必须对所清扫淋巴结本身行 Beclin 1 表达水平检测才能协助判断是否存在淋巴结转移。不过由于可手术患者多为术前判断 N2 无转移者，故可能存在由于挑选手术患者所造成的统计数据偏移，需要进一步研究观察。
综上所述，Beclin 1 水平可成为判断肺部肿瘤良恶性的一个参考指标，淋巴结 Beclin 1 水平可作为协助判断肺癌是否存在淋巴结转移的一个重要参考指标。
利益冲突：无。
Beclin 1 是目前受到广泛关注的自噬基因之一，其在多种肿瘤组织中表达不一，被认为是观察肿瘤发展及与肿瘤预后密切相关的指标之一。研究表明，当 Beclin 1 表达异常时，肿瘤的发生几率大幅增加[1-4]。不过其在肺癌中的作用目前并不确定。一些学者认为其与非小细胞肺癌的发生、发展及预后相关，可作为肿瘤预后的一个观测指标，如董桂兰等[5]发现自噬相关蛋白 Beclin1 表达下调可能参与了非小细胞肺癌的发生及发展，类似的研究还有不少[6-8]。由于肿瘤的预后与肿瘤的分期密切相关，特别是淋巴结是否转移及转移的程度是肿瘤分期的一个重要指标，而目前 Beclin 1 基因与肺癌淋巴结转移的关系并不明确。因此，了解 Beclin 1 基因表达水平与肿瘤淋巴结转移程度是协助判断 Beclin 1 基因水平是否与肿瘤预后有关的一项重要观察点。现回顾性分析我院 2009 年 9 月至 2016 年 9 月收治的 204 例肺癌患者的临床资料。
1 资料与方法
1.1 临床资料和分组
2011 年 9 月至 2016 年 9 月我院共收治 204 例非小细胞肺癌患者，其中男 116 例、女 88 例，平均年龄（55.3±11.2）岁。所有患者术前评估包括血液学检测、气管镜、头颅 CT、胸部 CT、骨扫描、腹部 B 超、心电图、肺功能检查。入组标准：术前评估无远处转移，纵隔淋巴结>1 cm 者行超声支气管镜穿刺活检，病理证实阳性者行新辅助化疗 2 周。排除标准：术前检查证实有远处转移者，术前评估无法耐受手术者。据肺癌淋巴结转移与否将所有患者分为无淋巴结转移组（N0 组）、有肺叶间和叶内淋巴结转移、无纵隔淋巴结转移组（N1组）和纵隔淋巴结转移组（N2组）。
1.2 手术方法
所有患者均行肺癌根治术，术中行系统性纵隔淋巴结清扫。切取部分标本组织采用 Western blotting 法测量 Beclin 1 水平，采用苏木精-伊红染色制作病理学标本。术后常规留置胸腔引流管，抗炎化痰支持治疗。癌旁正常组织取材为距离肿瘤边界 5 cm 以上。
1.3 统计学分析
采用 SPSS 22.0 统计软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用重复测量方差分析或秩和检验；率的比较采用 χ2 检验。P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
204 例非小细胞肺癌患者中鳞癌 36 例、腺癌 168 例，其中 N0 组 111 例、N1组 142 例、N2 组 51 例。
三组患者肿瘤组织 Beclin 1 水平随着淋巴结转移站数增加逐渐降低，差异有统计学意义（P<0.05）。三组患者 N1 Beclin 1 水平对比，N1 组和 N2 组较 N0 组明显偏低，差异有统计学意义（P<0.01）。三组患者 N2 Beclin 1 水平对比，N2 组较 N0 组及 N1 组明显偏低，差异有统计学意义（P<0.01，表1）。
表1
三组样本组织中 Beclin 1 水平比较（）
N0 组 N1、N2 Beclin 1 水平相近，差异无统计学意义（P>0.05）。N1 组 N1 Beclin 1 水平低于 N2 Beclin 1，差异有统计学意义（P<0.01）。N2 组 N2 Beclin 1 水平略高于 N1 Beclin 1 水平，但差异无统计学意义（P>0.05，表1）。
3 讨论
通过循环再利用细胞内大分子物质，清除受损细胞器，自噬基因可有效维持细胞内环境的稳定，其与细胞的增殖过程密切相关，亦可参与肿瘤的发生发展过程。Beclin 1 基因是目前受到极大关注的一种自噬基因，当与 PI3K 形成复合体后，可调节自噬前体结构中的 ATG 蛋白位置，进而调节自噬活性。作为抑癌基因，其缺乏可导致全身多个器官细胞癌变，如 Song 等[9]发现，Beclin 1 低表达有助于提高胰腺癌患者总生存期（OS）及无病生存期，上调体内 Beclin 1 水平可加快肿瘤的进展及提高其侵袭性。Wang 等[10]也发现 Beclin 1 表达水平与胃癌的大小、淋巴结转移程度及肿瘤侵袭程度密切相关。Beclin 1 高表达可促进 MKN-45 胃癌细胞的凋亡，抑制其向远处转移。因而 Beclin 1 可作为胃癌发生的抑制剂，成为胃癌治疗的可能靶点。类似的研究还有不少[11-13]。
在肺癌方面，目前的研究表明 Beclin 1 与肺癌的预后有一定关联，如 Zhou 等[14]的研究表明，Beclin 1 低表达非小细胞肺癌患者的 OS 仅 28 个月，明显低于 Beclin 1 高表达组，并且 Beclin 1 低表达与肺癌淋巴结转移密切相关。我们的数据也提示肺癌组织 Beclin 1 水平较正常组织偏低，与已有研究结果类似。影响肺癌预后的一个重要因素在于肿瘤的分期，特别是有无纵隔淋巴结转移对术后分期至关重要。目前对淋巴结标本有无转移主要采用病理切片的方式，虽然石蜡切片的精确度很高，但依然存在部分误差。在精准化治疗的今天，是否能采取病理切片联合其他指标提高诊断的精确性值得期待。在我们的研究中发现，Beclin 1 基因在转移淋巴结中的表达明显低于无转移淋巴结，且差异有统计学意义。这提示未来判断是否存在淋巴结转移时，Beclin 1 基因水平可作为一个重要的考量指标，若淋巴结病理切片阴性而 Beclin 1 水平较正常值偏低者，需再次复核以免漏诊，尤其对于病理切片介于良恶性之间的标本，Beclin 1 水平可能成为判断结果的有力证据。
我们的研究数据表明，在 N2 组患者中，N1 Beclin 1 表达水平较 N2 Beclin 1 略低，考虑可能是由于 N1 先出现转移，随后再导致 N2 转移，N1 转移时间较 N2 更长，故 Beclin 1 基因受影响时间更长所致。但两组数据对比差异并无统计学意义，故在有淋巴结转移的患者当中，Beclin 1 表达水平仅能判断是否存在淋巴结转移，但并不能帮助判断是取自哪一站淋巴结。
少部分并发纵隔淋巴结转移的肺癌患者存在跳跃性转移现象，从肺部淋巴液转流途径看这种现象难以理解，目前对为何存在这种现象暂无定论。既往对淋巴结的检测均为病理切片，是否存在 N1 漏诊导致跳跃性转移率升高值得探讨。联合 Beclin 1 检测后可提高 N1 淋巴结转移的检出率，是否会降低跳跃性转移的发生率值得进一步探究。
有研究提示 TNM 分期晚的肿瘤 Beclin 1 水平较分期早的患者低[15]。我们的数据也提示，N2 组肿瘤 Beclin 1 水平较 N1 组和 N0 组偏低，且差异有统计学意义，考虑 N2 组 TNM 分期普遍较 N0 和 N1 组更差，故 N2 组肿瘤 Beclin 1 水平较 N1 组和 N0 组更低，这与已有研究基本相符。不过虽然淋巴结是分期的一个重要因素，但肿瘤的大小、位置对肿瘤分期也有很大影响，故单测肿瘤组织本身的 Beclin 1 水平可能无法判断该患者是否并发 N1 或 N2 淋巴结转移，必须对所清扫淋巴结本身行 Beclin 1 表达水平检测才能协助判断是否存在淋巴结转移。不过由于可手术患者多为术前判断 N2 无转移者，故可能存在由于挑选手术患者所造成的统计数据偏移，需要进一步研究观察。
综上所述，Beclin 1 水平可成为判断肺部肿瘤良恶性的一个参考指标，淋巴结 Beclin 1 水平可作为协助判断肺癌是否存在淋巴结转移的一个重要参考指标。
利益冲突：无。
